儀器和試劑：日本島津公司Le-10A液相色譜；SPD-10A紫外-可見分光度檢測(cè)器；色譜柱C18Shim-pack VP-ODS 150×4.6mm,維生素D₃對(duì)照品（含量≧99.9%），甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為二重蒸餾水。對(duì)照品儲(chǔ)備液為1.000mg/ml的維生素D₃甲醇溶液。方法和結(jié)果：柱溫為室溫，流速為1ml/min,進(jìn)樣量為10ul,檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，同一批次樣品，多次檢測(cè)（見表1）。

表1 不同流動(dòng)相配比時(shí)，維生素D₃的含量測(cè)定

液相色譜是以液體作為流動(dòng)相的一種色譜分離技術(shù)。它利用流動(dòng)相液體將被分離混合物帶入色譜柱中，根據(jù)各組分在固定相及流動(dòng)相中吸附能力、分配系數(shù)、離子交換作用或分子大小的差異進(jìn)行分離。液相色譜并不受樣品的揮發(fā)度和穩(wěn)定性的限制,且非常適合于分離生物藥品的大分子、離子型化合物、不穩(wěn)定的天ran產(chǎn)物以及其他各種高分子量的或不穩(wěn)定的化合物。對(duì)于很難分離的樣品,用液相色譜常常比用氣相色譜容易完成,被廣泛應(yīng)用于石油和化工等領(lǐng)域。目前研究和使用較多的液相色譜主要有高液相色譜法(HPLC)。